刺激试验
皮肤刺激试验
皮肤刺激试验：是一种评估物质对皮肤刺激性的实验方法，主要用于检测化妆品、药品、化学物质等对皮肤的刺激反应。该试验通过观察实验动物或人类皮肤在接触物质后的反应，评估物质对皮肤的刺激性，为产品安全性和风险评估提供依据。
皮肤刺激试验方法：
1. 试验前准备：
试验前4h～24h，对动物进行标识并称重，将动物背部脊柱两侧被毛除去（约10cm×15cm），作为试验和观察部位。
2. 试验步骤：
将供试品敷贴于动物背部脊柱两侧，将阴性对照品同法操作敷贴在对照部位。用绷带半封闭性或封闭性固定敷贴片至少4h。接触期结束后取下敷贴片，用持久性墨水对接触部位进行标记，并用温水除去残留试验材料。并于接触后24h、48h和72h观察并记录接触点的红斑、水肿反应。
3. 结果评价：
在72h评分后，分别将每只动物试验样品在（24±2）h、（48±2）h和（72±2）h引起的全部红斑和水肿记分相加，再将所有计分之和除以6（两个试验/观察部位，3个时间点）计算出某一动物的原发刺激指数。将每只动物全部原发性刺激记分相加后再除以动物总数（3只）得出试验样品原发性刺激指数。同法计算岀对照原发性刺激记分，将试验材料原发性刺激记分减去该记分，即得出原发性刺激记分。
口腔刺激试验
口腔刺激试验：应仅考虑用于预期与口腔组织接触的材料,并且只有在用其他方法不能得到安全性数据的情况下才考虑进行，对材料在试验条件下产生口腔组织刺激反应的潜在性做出评定。
口腔刺激试验方法：
1. 试验前准备：
筛选合格的动物除掉动物项圈，翻转颊囊用生理盐水冲洗后，检查有无异常。
2. 试验步骤：
用一个φ10mm的棉球，分别取0.5mL试验液浸透，放入动物的一侧颊囊内。另一侧颊囊不放样品，根据不同浸提介质另取两组地鼠作为阴性对照组。使棉球与地鼠口腔黏膜接触 5min。接触后除去项圈和棉球, 用生理盐水冲洗颊囊，重新给动物带上项圈放回笼中。重复上述步骤，每小时1次，共4 小时。 取出试验球后肉眼观察颊囊，并且在每次接触前（如需多次接触时）检查颊囊，根据下述评分系统判定动物每一观察期颊囊表面红斑反应并记分。
接触24h后肉眼观察颊囊，无痛处死动物。取试样接触部位的黏膜及周围组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色制片，进行组织学评价。
3. 结果判断：
肉眼观察评价：每一观察时期肉眼观察试样放置部位黏膜情况。比较试验侧及对照侧黏膜，按照口腔黏膜反应记分系统进行口腔黏膜临床表现记分。每一观察时期各动物观察记分相加后再除以观察动物总数得出每只动物平均记分。
直肠刺激试验
直肠刺激试验：应仅考虑用于预期与直肠组织接触的材料,并且只有在用其他方法不能得到安全性数据的情况下才考虑进行。对材料在试验条件下产生直肠组织刺激反应的潜在性做出评定。
直肠刺激试验方法：
1. 试验步骤
将一短软管(6cm)或一钝头插管与一容量大于1mL的注射器连接,注射器和导管注满后可使动物能接受1mL试验样品。应为每只动物分别准备一套注射器和连接导管。
将动物置于固定器中固定,以便于接触会阴部位。或用固定器具将动物束缚住后再固定其后肢,以暴露出会阴部位。
导管插入前可用对照样品或适当的润滑剂湿润处理。
提起动物尾巴暴露出会阴,然后将湿润处理过的导管轻柔地插入直肠,用注射器注入1mL试验液。抽出导管并以适当的方法处置掉。
由于动物个体直肠容积的差异性,试验样品注入时或注入后可能会有溢出,可用软纸巾轻柔拭去溢出的液体。
每次间隔(24±2)h重复上述步骤,连续5d。
对于长期重复接触试验,应根据预期临床接触时间确定接触次数、时间和间隔期。
2. 动物观察
初次接触后(24±2)h和每次试验操作前注意并记录会阴部位溢液、红斑和刺激状况。
对于出现过度溢液、肿胀或难以给药的动物,应无痛处死后做组织学检查。
3. 结果评价
肉眼观察评价
末次接触后(24±2)h无痛处死动物,完整切下直肠后纵向剖开,检查上皮组织层的刺激、损伤以及坏死情况。
将直肠和大肠的末端放入适当的固定剂中固定后进行组织学检查。
将试验兔的直肠组织与对照兔直肠组织进行比较。
记录并描述肉眼观察下每只动物直肠组织的状况,注意试验与对照部位之间的差别。
注：这些观察可能有助于组织学评价。
4. 组织学评价
应由病理学家对直肠组织的刺激作用进行评价。
试验组全部动物显微镜评价记分相加后再除以观察总数即得出试验组平均记分。最大记分为16。
对照组同法计算。
对照组动物出现显微镜评价总分大于9时,表明试验操作中可能造成损伤。如其他试验或对照动
物出现同样的高分时,可能有必要进行复试。
试验组平均记分减去对照组平均记分即得出刺激指数。
阴道刺激试验
阴道刺激试验：应仅考虑用于预期与阴道组织接触的材料,并且只有在用其他方法不能得到安全性数据的情况下才考虑进行。对材料在试验条件下产生阴道组织刺激反应的潜在性做出评定。
阴道刺激试验方法：
1. 试验前准备：
取新西兰兔，随机分为供试品组和对照组，每组3只。将动物置于固定器中固定，暴露阴道口。导管插入前用对照样品或适当的润滑剂湿润处理。
2. 试验步骤：
提起动物尾巴暴露出阴道口，然后将湿润过的导管轻柔的插入阴道，用联有软导管的注射器注入1mL试验液。每次间隔24h连续重复上述步骤，连续5d。初次接触后24h和每次试验操作前观察并记录阴道口和会阴溢液，红斑和刺激情况。末次接触后24h，无痛处死动物，完整切下阴道后纵向进行大体检查，检查上皮组织层的刺激、损伤以及坏死情况。
组织学检查：将阴道组织放入福尔马林中固定后，分别对阴道前端2cm，中央2cm及阴道末端2cm处的进行取材并分别标识为1、2、3，取材厚度约0.3cm，每处一段，近阴道前端朝向切面，然后组织进行石蜡包埋切片，HE染色制片，进行组织学评价。将试验兔的阴道组织与对照兔阴道组织进行比较。记录并描述肉眼观察下每只动物阴道组织的状况。
3. 结果评价：
肉眼观察：完整切下阴道组织，检查上皮组织层的刺激、损伤以及坏死情况。将试验兔的阴道组织与对照兔阴道组织进行比较,记录并描述肉眼观察下每只动物阴道组织的状况。
组织学观察：按下述记分系统对每一组织进行评分。试验组动物显微镜评价记分相加后再除以观察总数即得出试验组平均记分。试验组平均记分减去对照组平均记分即得出刺激指数。